1982年创刊| ISSN 1008-3847| CN 44-1202/S
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本期杂志
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面向生产，而向基层，面向农村；
以普及为主，兼顾提高；
以实用为主，兼顾基础理论；
立足广东，流通全国，走向世界。
养禽与禽病防治 2024年第3期 - 11 -

H5 亚型禽流感病毒病毒样颗粒的制备及鉴定

董楠 ( 农业农村部兽用生物制品工艺技术重点实验室 , 广东 , 肇庆 526238 )
刘郁夫 ( 华农（肇庆）生物产业 技术研究院有限公司 , 广东 , 肇庆 526238 )
杨小云 ( 华农（肇庆）生物产业 技术研究院有限公司 , 广东 , 肇庆 526238 )
中图分类号:S855.3 文献标志码:A 文章编号:1008-3847(2024)03-0011-08
摘要: 为构建 H5 亚型禽流感病毒病毒样颗粒，研制新型基因工程疫苗。利用杆状病毒 -昆虫细胞表达系统，在 Sf 9 细胞中共表达 H5 亚型禽流感病毒 HA 蛋白和 M1 蛋白。将 H5 亚
型禽流感病毒的 HA 基因和 M1 基因分别克隆至 pFastBac-dual 载体 PH 和 P10 启动子下游多克隆位点，获得穿梭质粒 pFastBac-H5-M1，再通过蓝白斑筛选获得重组杆粒，将重组杆粒转染至昆虫细胞 Sf 9 中，拯救重组杆状病毒，通过间接免疫荧光、western blot 试验鉴定是否表达特异性蛋白，最后在透射电镜下观察病毒样颗粒的形态。重组 H5 亚型禽流感病毒 HA 基因和 M1基因的杆状病毒，在 Sf 9 细胞中盲传 3 代后，可在显微镜下观察到杆状病毒感染引起的细胞肿胀破裂等细胞病变 ；通过间接免疫荧光试验可观察到细胞内绿色荧光信号，证明重组杆状病毒拯救成功 ；western blots 试验结果显示 Sf 9 细胞中可检测到 HA 蛋白和 M1 蛋白，目的条带大小分别为 70 ku 和 25 ku 左右，与预期相符，并且均以分泌上清的形式表达 ；通过透射电镜可在Sf 9 细胞上清中观察到与流感病毒结构类似的颗粒。本研究成功构建共表达 H5 亚型禽流感病毒 HA 蛋白和 M1 蛋白的重组杆状病毒，该重组杆状病毒可在 Sf 9 昆虫细胞中组装成与天然流感病毒粒子结构相似的颗粒样物质。
关键字: H5 亚型 禽流感病毒 杆状病毒 病毒样颗粒
责任编辑: 贾伟新