1982年创刊| ISSN 1008-3847| CN 44-1202/S
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面向生产，而向基层，面向农村；
以普及为主，兼顾提高；
以实用为主，兼顾基础理论；
立足广东，流通全国，走向世界。
养禽与禽病防治 2024年第6期 - 2 -

实时荧光定量 TaqMan RT-PCR 检测坦布苏病毒方法的建立 及初步应用

袁朝霞 ( 仲恺农业工程学院 , 广东 , 广州 510225 )
刘湘 ( 广州达农生物科技有限公司 , 广东 , 广州 510665 )
王友令 ( 广州达农生物科技有限公司 , 广东 , 广州 510665 )
中图分类号:S855.3 文献标志码:A 文章编号:1008-3847(2024)06-0002-06
摘要: 研究旨在建立一种检测鸭坦布苏病毒（Duck Tembusu Virus, DTMUV）的实时荧光定量 TaqMan RT-PCR 检测方法。制备含有 DTMUV 目的基因的标准质粒，以 10 倍比稀释的 DTMUV 标准品建立标准曲线，测定敏感性。同时采用 5 个稀释度的标准品验证该方法的批内和批间重复性，并与本实验室所保存的多种病毒进行特异性检测。结果 ：建立的实时荧光定量 TaqMan RT-PCR 方法仅在鸭坦布苏病毒 RNA 样本中检测出荧光信号。最低检出浓度为 3.70×102 copies/µL ，敏感性良好，是常规 RT-PCR 的 100 倍 ；线性范围达 10 个数量级。该方法重复性良好，批内和批间的变异系数均在 0.8% 以下。经临床样品检测证实该法可用于DTMUV 的临床鉴别诊断及流行病学调查，为该病的综合防控措施提供分子生物学参考依据。
关键字: 鸭坦布苏病毒 实时荧光定量 RT-PCR TaqMan 探针
责任编辑: 孙敏华