1982年创刊| ISSN 1008-3847| CN 44-1202/S
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养禽与禽病防治 2024年第8期 - 2 -

番鸭细小病毒 VP3 蛋白的原核表达及抗原性分析

刘郁夫 ( 肇庆学院生命科学学院 , 广东 , 肇庆 526060 )
萧碧扬 ( 肇庆学院生命科学学院 , 广东 , 肇庆 526060 )
董楠 ( 华农（肇庆）生物产业技术研究院有限公司 , 广东 , 肇庆 526238 )
中图分类号:S855.3 文献标志码:A 文章编号:1008-3847(2024)08-0002-05
摘要: 为原核表达番鸭细小病毒（Muscovy duck parvovirus，MDPV）VP3 蛋白，评价MDPV VP3 蛋白在番鸭中的抗原性。将 MDPV VP3 基因按照大肠杆菌密码子偏嗜性优化后，克隆至原核表达载体 pET-28a，经 IPTG 诱导表达和 His 镍柱纯化后，获得 VP3 纯化蛋白，并进行 SDS-PAGE 蛋白电泳和 western blots 鉴定。通过透射电镜观察MDPV VP3 蛋白在大肠杆菌中形成病毒样颗粒的情况，以纯化后的 VP3 蛋白免疫种番鸭，评价 MDPV VP3 蛋白的抗原性。结果显示，MDPV VP3 蛋白可在大肠杆菌 BL21（DE3）中以沉淀包涵体的形式高效表达，SDS-PAGE 和 Western blots 试验结果显示 VP3 目的条带大小为 60kDa 左右，与预期相符，纯化后 VP3 蛋白浓度为 5.64mg/mL。通过透射电镜，可在 VP3 蛋白表达上清样品中观察到直径约为 20nm 的颗粒样物质，表明单独表达 MDPV VP3 蛋白可在大肠杆菌中自组装形成病毒样颗粒。将制备的 VP3 蛋白免疫种番鸭，利用间接 ELISA 试验检测番鸭血清中特异性抗体水平，免疫后 14d，OD450 值为 0.75~0.90，表明制备的 VP3 蛋白抗原性良好。本试验在大肠杆菌中成功表达纯化 MDPV VP3 蛋白，具有良好的抗原性，具备研制 MDPV 亚单位疫苗的开发前景，本研究可为进一步评 MDPV VP3 蛋白的免疫保护效果提供前期基础。
关键字: 番鸭细小病毒 VP3 原核表达 抗原性
责任编辑: 黄淑坚