柔嫩艾美耳球虫有性发育相关基因Etpigu的克隆表达与免疫保护效果评估
梁柏维
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仲恺农业工程学院;广东省农业科学院动物卫生研究所 / 广东省畜禽疫病防治研究重 点实验室 / 农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室 / 猪禽种业全国重点实验室
, 广东 , 广州 510550
)
宋勇乐
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广东省农业科学院动物卫生研究所 / 广东省畜禽疫病防治研究重 点实验室 / 农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室 / 猪禽种业全国重点实验室
, 广东 , 广州 510640
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廖申权
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广东省农业科学院动物卫生研究所 / 广东省畜禽疫病防治研究重 点实验室 / 农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室 / 猪禽种业全国重点实验室
, 广东 , 广州 510640
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戚南山
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广东省农业科学院动物卫生研究所 / 广东省畜禽疫病防治研究重 点实验室 / 农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室 / 猪禽种业全国重点实验室
, 广东 , 广州 510640
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李 娟
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广东省农业科学院动物卫生研究所 / 广东省畜禽疫病防治研究重 点实验室 / 农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室 / 猪禽种业全国重点实验室
, 广东 , 广州 510640
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吕敏娜
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广东省农业科学院动物卫生研究所 / 广东省畜禽疫病防治研究重 点实验室 / 农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室 / 猪禽种业全国重点实验室
, 广东 , 广州 510640
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林栩慧
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广东省农业科学院动物卫生研究所 / 广东省畜禽疫病防治研究重 点实验室 / 农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室 / 猪禽种业全国重点实验室
, 广东 , 广州 510640
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蔡海明
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广东省农业科学院动物卫生研究所 / 广东省畜禽疫病防治研究重 点实验室 / 农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室 / 猪禽种业全国重点实验室
, 广东 , 广州 510640
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陈祥杰
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广东省农业科学院动物卫生研究所 / 广东省畜禽疫病防治研究重 点实验室 / 农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室 / 猪禽种业全国重点实验室
, 广东 , 广州 510640
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朱易斌
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广东省农业科学院动物卫生研究所 / 广东省畜禽疫病防治研究重 点实验室 / 农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室 / 猪禽种业全国重点实验室
, 广东 , 广州 510640
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张健騑
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广东省农业科学院动物卫生研究所 / 广东省畜禽疫病防治研究重 点实验室 / 农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室 / 猪禽种业全国重点实验室
, 广东 , 广州 510640
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黄运茂
(
仲恺农业工程学院
, 广东 , 广州 510550
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孙铭飞
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广东省农业科学院动物卫生研究所 / 广东省畜禽疫病防治研究重 点实验室 / 农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室 / 猪禽种业全国重点实验室
, 广东 , 广州 510640
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中图分类号:S855.9
文献标志码:A
文章编号:1008-3847(2026)06-0018-08
作者简介：梁柏维（2000 年生 )，男，硕士研究生，主要研究方向为兽医寄生虫病防控。E-mail：liangbowei0909@163.com。
宋勇乐（1991 年），男，助理研究员，主要研究方向为顶复门寄生原虫生物学功能与致病机制研究。E-mail：songyongle_ok
@126.com。
# 表示共同第一作者
*通讯作者：黄运茂（1976 年生），教授，主要研究方向动物遗传育种与繁殖。E-mail: huangyunmao@zhku.edu.cn。孙铭飞（1978
年生），研究员，主要研究方向为兽医寄生虫病防控。E-mail: smf7810@126.com。
基金项目：国家重点研发计划项目（2023YFD1802400），“十四五”广东省农业科技创新十大主攻方向“揭榜挂帅”项目（NO.
2024KJ14），国家自然科学基金项目（32503067），省级现代农业产业技术体系创新团队建设项目（2024CXTD15），广东
省基础与应用基础研究基金项目（2025A1515010521），广东省科技计划项目（2021B1212050021，2023B1212060040），猪禽
种业全国重点实验室开放课题（2023QZ-NK05, GDNKY-ZQQZ-K07），广州市科技计划项目（2023B04J0137），科技创
新战略专项资金（高水平农科院建设）（202110TD, 202122TD, R2019YJ-YB3010, R2020PY-JG013, R2020QD-048, R2021PYQY007，R2023PY-JG018），广东省农业科学院协同创新中心项目（XTXM202202），广东省现代农业产业技术体系创新团
队建设专项（2022KJ119）。
摘要:
为探究柔嫩艾美耳球虫有性发育相关 EtPIGU 蛋白的免疫保护性，本研究以柔嫩艾美耳球虫配
子体 cDNA 为模板，通过 PCR 扩增获得 EtPIGU 基因片段，通过同源重组技术与线性化载体 pET32a（+）
融合，构建重组表达质粒 pET32a-EtPIGU，转化至大肠杆菌表达系统进行诱导表达，经亲和层析的方法
纯化重组蛋白 EtPIGU，将佐剂与蛋白混合进行乳化后免疫。设空白对照组、佐剂对照组、高剂量（200
μg/ 羽）、中剂量（100 μg/ 羽）和低剂量免疫组（50 μg/ 羽）、未免疫攻虫组，共 6 个组，通过动物实
验初步评价其免疫保护效果。结果 ：成功构建重组表达质粒 pET32a-EtPIGU，并纯化出 EtPIGU 蛋白。
Western Blot 结果显示，EtPIGU 蛋白在约 70 ~ 100 kDa 处出现特异性条带，确定该蛋白成功表达。动物实
验结果显示，中剂量和低剂量免疫组与未免疫攻虫组、佐剂对照组相比，盲肠病变评分均显著低于未免疫
攻虫组和佐剂对照组（P ＜ 0.05），其中中剂量免疫组病变记分减少率达 34.67% ；各免疫组鸡每克粪便卵
囊数（OPG）与未免疫攻虫组和佐剂对照组相比差异极显著（P ＜ 0.001），其中高剂量免疫组的相对卵囊
产量比未免疫攻虫组低了 55%。本研究证实了柔嫩艾美耳球虫有性发育阶段高表达抗原 EtPIGU 对鸡体具
有一定的免疫保护作用，表明该蛋白可作为鸡球虫病亚单位疫苗开发的潜在候选抗原，为新型疫苗的研制
提供了理论依据。
关键字:
柔嫩艾美耳球虫 PIGU 免疫保护 原核表达
参考文献
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责任编辑: 林瑞庆
