实时荧光定量 TaqMan PCR 检测鸡传染性贫血病毒方法的建立以及初步应用
张旭
(
惠州华晟生物技术有限公司
, 广东 , 惠州 516800
)
刘湘
(
广州达农生物科技有限公司
, 广东 , 广州 510665
)
李卫东
(
山东鲁南牧工商有限公司
, 山东 , 枣庄 277100
)
杨秉桦
(
. 山东省莒县招贤畜牧兽医站
, 山东 , 莒县 276500
)
邵明辰
(
山东鲁南牧工商有限公司
, 山东 , 枣庄 277100
)
刘兆洁
(
惠州华晟生物技术有限公司
, 广东 , 惠州 516800
)
曾小辉
(
广州达农生物科技有限公司
, 广东 , 广州 510665
)
蔡广娣
(
广州达农生物科技有限公司
, 广东 , 广州 510665
)
熊金光
(
广州达农生物科技有限公司
, 广东 , 广州 510665
)
许芬芬
(
惠州华晟生物技术有限公司
, 广东 , 惠州 516800
)
中图分类号:S855.3
文献标志码:A
文章编号:1008-3847(2026)07-0015-06
# 共同第一作者:张旭,男,硕士研究生,主要从事家禽传染病检测及防控工作,E-mail:zhangxu@huassw.com;刘湘,女,
本科,主要从事动物疫病诊断试剂研究,E-mail:17687729445@139.com。
* 通讯作者:许芬芬(1984-),女,兽医师,主要从事畜禽传染病防控工作,E-mail:xufenfen@huassw.com。
摘要:
本研究旨在建立一种适用于检测鸡传染性贫血病毒(Chicken anemia virus, CAV)的实时荧光
定量 TaqMan PCR 技术。以 CAV-SD19/4604 株 DNA 为模板,建立检测 CAV 的实时荧光定量 PCR 方法。
制备含有上述 CAV 目的片段的 DNA 为标准品,以 10 倍比稀释的标准品建立标准曲线并测定敏感性。同
时采用 5 个稀释度的标准品验证该方法的批内和批间重复性,并与本实验室所保存的多种病毒进行特异性
检测。结果 :建立的实时荧光定量 TaqMan PCR 方法仅在 CAV 的 DNA 样本中检出荧光信号。最低检出
量为 1.26×102
copies/μL ;线性范围达 11 个数量级。该方法重复性良好,批内变异系数不足 0.6% ;批间
变异系数不足 0.9%。经临床样本检测并与常规 PCR 检测符合率高达 98%,综上,本研究建立的 CAV 实
时荧光定量 PCR 检测方法灵敏度高,特异性强、重复性好,可用于临床样品中 CAV 的快速检测,从而
减少 CAV 在鸡群间的传播,以降低其他病原体继发感染的可能性,提高经济效益。
关键字:
鸡传染性贫血病毒 实时荧光定量 PCR TaqMan 探针
参考文献
[1] Rosario K, Breitbart M, Harrach B, et al. Revisiting
the taxonomy of the family circovidae: establishment
of the genuscyclo virus and removal of the genus
Gyrovirus[J]. Archives of Virology, 2017, 162(5): 1447-
1463.
[2] MHJV m Noteborn. Chicken anemia virus induced
apoptosis:underlying molecular mechanisms[J]. Vet
Microbiol, 2004, 98(2): 89-94.
[3] Yao S, Tuo T, Gao X, et al. Molecular epidemiology
of chicken anaemia virus in sick chickens in China
from 2014 to 2015[J]. Public Library of Science, 2019,
14(1): e0210696.
[4] Yuasa N, Taniguchi T, Yoshida I. Isolation and
some characteristics of an agent inducing anemia in
chicks[J]. Avian Dis, 1979, 23(2): 366-385.
[5] Niu Y, Sun Q, Zhang G, et al. Epidemiological
investigation of outbreaks of fowl adenovirus
infections in commercial chickens in China[J].
Transboundary Emerging Disease, 2018, 65(1): 121-
126.
[6] 苏奇 . 新城疫弱毒疫苗中禽腺病毒和鸡传染性贫
血病毒混合污染的鉴定及人工模拟致病性分析 [D].
泰安 : 山东农业大学 , 2019.
[7] Yang C, Xu Y, Jia R, et al. Prokaryotic expression
of a codon-optimized capsid gene from duck circovirus
and its application to an indirect ELISA[J]. J Virol
Methods, 2017, 247: 1-5.
[8] 记品品 . 基于纳米抗体的 Fenobody 和 RANbody
禽新城疫病毒夹心 ELISA 检测方法的建立 [D]. 咸
阳 : 西北农林科技大学 , 2020.
[9] 谢碧林 , 林志敏 , 韩彬彬 , 等 . 新型鸭呼肠孤病毒
研究进展 [J]. 福建畜牧兽医 , 2021, 43(01), 23-26+30.
[10] Su Q, Li Y, Meng F, et al. Newcastle disease
virus attenuated vaccine co-contaminanted with
fowl adenovirus and chicken infectious anemia virus
results in inclusion body hepatitis-hydropericardium
syndrome in poultry[J]. Vet Microbiol, 2018, 218: 52-59.
[11] 朱玉琴 . 实时荧光 PCR 检测胃黏膜组织中幽门
螺杆菌的应用研究 [D]. 福州 : 福建医科大学 , 2020.
[12] Guo K, Dormitorio T V, Ou S C. Development
of TaqMan real-time RT-PCR for detection of avian
reoviruses[J]. Journal of Virological Methods, 2011,
177:75.
责任编辑: 吴耀棠